微生物检测化验员手指口述操作法

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发布时间:17-02-23 17:47分类:技术文章
标签:菌落计数器,菌落计数器的操作流程与方法
菌落计数器是一种数字显示式自动细菌检验仪器。但是随着科技的进步,菌落计数器也由普通的衍变成了全自动菌落计数器。主要体现在配置越来越高,功能越来越全。计数的速度越来越快,准确性也越来越高。菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每克(或每ml)原始样品中所含细菌菌落总数。菌落计数器的是怎样操作的?基本操作一般包括:样品的稀释–倾注平皿–培养48小时–计数报告。国内外菌落总数测定方法基本一致,从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同,只是在某些具体要求方面稍有差别,如有的*在样品稀释和倾注培养进,对吸管内液体的流速,稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。1.操作方法:培养到时间后,计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后,求出同稀释度的各平板平均菌落数,计算处原始样品中每克(或每ml)中的菌落数,进行报告。2.到达规定培养时间,应立即计数。如果不能立即计数,应将平板放置于0-4℃,但不得超过24h。3.计数时应选取菌落数在30~300之间的平板(SN标准要求为25~250个菌落),若有二个稀释度均在30~300之间时,按*标准方法要求应以二者比值决定,比值小于或等于2取平均数,比值大于2则其较小数字(有的规定不考虑其比值大小,均以平均数报告)。4.若所有稀释度均不在计数区间。如均大于300,则取*高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如均小于30,则以*低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。如菌落数有的大于300,有的又小于30,但均不在30~300之间,则应以*接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长,则应按小于1乘以*低稀释倍数报告之。有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。5.不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比(同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近),即稀释倍数愈高菌落数愈少,稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象,则应视为检验中的差错(有的食品有时可能出现逆反现象,如酸性饮料等),不应作为检样计数报告的依据。6.当平板上有链状菌落生长时,如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,则应作为一个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链均应按一个菌落计算,不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长,该平板一般不宜采用,如片状菌落不到平板一半,而另一半又分布均匀,则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。7.当计数平板内的菌落数过多(即所有稀释度均大于300时),但分布很均匀,可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。8.菌落数的报告,按*标准方法规定菌落数在1~100时,按实有数字报告,如大于100时,则报告前面两位有效数字,第三位数按四舍五入计算。固体检样以克(g)为单位报告,液体检样以毫升(ml)为单位报告,表面涂擦则以平方厘米(cm2)报告。欲了解更多仪器仪表产品信息,请登录“爱仪器仪表网”。

微生物检测化验员手指口述操作法 一、本岗位安全环境描述
我是质保部化验员***,负责产品微生物化验工作。本岗位仪器设备有电子天平1台,无菌操作台1台,紫外灯2盏,微波炉1台,电热恒温培养箱2台。
1、电子天平为ALC—1100型:最大称量范围为1100g,精确度10mg。
2、电热恒温培养箱型号为DNP9082,电源电压220v,功率300w,调控温度范围到65℃。
3、微波炉型号为HR—7103E,电源电压220v,功率1200w。
二、本岗位操作流程手指口述
备齐试验所须物品,消毒无菌间(紫外灯照射30分钟),进入无菌间,更换隔离衣,75%酒精进行手消毒。
1、大肠杆菌检验手指口述:
①手指电子备齐天平口述并操作:调整天平水平位置,校准天平。
②手指样品并口述:称取25g样品,放入225ml生理盐水中,摇匀,制成1:10稀释液。
③手指吸管并口述:用10ml吸管从1:10稀释液中吸取10ml注入乳糖胆盐发酵管中,共接种三管。再吸取5ml注入含45ml生理盐水中,制成1:100稀释液。
④另取1支10ml吸管,从1:100稀释液中吸取10ml注入发酵管中,共接种三管,再吸取5ml注入含45ml生理盐水中,制成1:1000稀释液。
⑤另取1支10ml吸管,从1:1000稀释液中吸取10ml注入发酵管中,共接种三管。
⑥将发酵管拿出放入恒温36℃的培养箱内,培养24小时,然后观察结果。
2、菌落总数检验手指口述:
①手指吸管并口述:取1ml吸管1支,从1:100稀释液中吸取1ml注入平皿中,共做两个平皿,另取1ml吸管从1:1000的稀释液中吸取1ml注入平皿中,共做两个平皿。
②手指营养琼脂并口述:将凉至46℃的营养琼脂注入平皿中,每个注入15ml,转动平皿,使琼脂与检样混合均匀。
③待琼脂凝固后,翻转平皿,将其放入恒温36℃的培养箱内,培养48小时,然后观察结果。
3、大肠菌群结果观察
①手指发酵管并口述:如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则报告阴性,如有产气者,将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板上,36℃培养18~24小时,取出,观察群落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
②在上述平板上挑取可疑菌群菌落1~2个,进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,36℃培养24小时,观察产气情况,凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
③报告:根据阳性管数,查MPN检索表,报告大肠菌群数。 4、菌落总数报告
①菌落在100以内,按实数报告,大于100时,取2位有效数字(4舍5入)报告。
②计数时应选菌落在30~300之间的平皿,以2者比值决定,比值小于或等于2取平均数,大于或等于2取较小数字。
③若所有稀释度均不在30~300之间,大于300取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告;均小于30,则以最低稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
④当平皿内菌落过多,但分布均匀时,可取平皿一半或1/4计数,再乘以相应稀释倍数报告。
三、安全预想要诀 1、严禁用湿手或湿布触摸、擦电子天平及其它带电设备。
2、恒温箱应放在通风干燥处,远离易燃易爆物。
3、维修微波炉时,应拔掉主电源,加热时严禁用手接触表面,以防烫伤。

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金黄色葡萄球菌的检验方法操作步骤

1、增菌培养法

(1)检样处理:按无菌操作取检样25g(ml),加入225mL灭菌生理盐水,固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。

(2)增菌及分离培养:吸取5ml上述混悬液,接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪陈大豆肉汤50mL培养基内,36℃士1℃培养24h,转种血平板和Baird一Parker平板,36℃士1℃培养24h,挑取血平板上金黄色(有时为白色)菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

(3)形态:本菌为革兰氏阳性球菌,排列呈葡萄球状,无芽胞,无荚膜,致病性葡萄球菌菌体较小,直径约为0.5um~1um。

(4)在肉汤中呈混浊生长,在胰酩膝大豆肉汤内有时液体澄清,菌量多时呈混浊生长,血平板上菌落呈金黄色,有时也为白色,大而突起、圆形、不透明、表面光滑,周围有溶血圈。在Baird一Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2mm3mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度,偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落;但无混浊带及透明图。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些,外观可能粗糙并干燥。

(5)血浆凝固酶试验:吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL,放入小试管中,再加人培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤堵养物0.5mL,振荡摇匀,置36℃士1℃温箱或水浴内,每半小时观察一次,观察6h,如呈现凝固,即将试管倾斜或倒置时,呈现凝块者,被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。

2、直接计数方法6.2.1吸取上述1:10混悬液,进行10倍递次稀释,根据样品污染情况,选择不同浓度的稀释液1mL,分别加人三块Baird一Parker平板,每个平板接种量分别为0.3mL、0.3mL、0.4mL,然后用灭菌L棒涂布整个平板。如水分多不易吸收,可将平板放在36℃士1℃
lh,等水分蒸发后反转平皿置36℃士1℃培养。

在三个平板上点数周围有混浊带的黑色菌落,并从中任选五个菌落,分别接种血平板,36℃士1℃
24h培养后进行染色镜检、血浆凝固酶试验,步骤同增菌培养法。

3、菌落计数:将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加,乘以血浆凝固酶阳性数,除以5,再乘以稀释倍数,即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。

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